作者：熊丹寧1， 趙 勇2， 劉 青2， 朱 正2 作者單位：(深圳市第九人民醫(yī)院1耳鼻咽喉科;2病理科,廣東 深圳 518116)
【摘要】 目的：探討鼻咽癌組織中COX2蛋白和p73蛋白的表達(dá)及其臨床意義。方法：免疫組化SP法檢測86 例鼻咽癌組織中COX2蛋白和p73蛋白的表達(dá)。結(jié)果：COX2和p73在鼻咽癌中的陽性表達(dá)率為80.2%、60.5%;二者呈顯著正相關(guān)(r=0.668,P<0.01)。結(jié)論:COX2蛋白和p73蛋白的過度表達(dá)在鼻咽癌的發(fā)生進(jìn)展過程中起重要作用。
【關(guān)鍵詞】 腫瘤學(xué);鼻咽癌;COX2蛋白;p73蛋白
Expression of COX2 and p73 Proteins in Nasopharyngeal Carcinoma and their Clinical Significance XIONG Danning1，ZHAO Yong2，LIU Qing2，ZHU Zheng2 (1Department of Otolaryngology;2Department of Pathology,Ninth People's Hospital,Shenzhen,Guangdong 518116,China)
Abstract:Objective To explore the expression of COX2 and p73 proteins in nasopharyngeal carcinoma(NPC) and their clinical significance.Methods The expression of COX2 and p73 proteins were determined with SP staining in 86 patients with nasopharyngeal carcinoma.Results The positive rates of COX2 and p73 expression were 80.2% and 60.5%,respectively.There was significant positive correlation between COX2 expression and p73 expression(r=0.668,P<0.01).Conclusion The overexpression of COX2 and p73 may play an important role in the development of NPC.
Key words: COX2;p73;Nasopharyngeal carcinoma
鼻咽癌(Nasopharyngeal Carcinoma，NPC)是我國南方常見的惡性腫瘤, 廣東為高發(fā)區(qū)。在確診的鼻咽癌中,其5年生存率長期徘徊在50%～60%左右。環(huán)氧合酶(Cyclooxygenase,COX)和p73是近年發(fā)現(xiàn)的新型腫瘤標(biāo)志物[1-2]，其在鼻咽癌中的表達(dá)雖有個(gè)別報(bào)道，但尚不充分和完善。本研究通過聯(lián)合檢測鼻咽癌腫瘤組織中COX2和p73蛋白的表達(dá)情況，以探討二者在鼻咽癌發(fā)生發(fā)展中的意義。
1 資料與方法
1.1 病例選擇
1999 年-2008 年深圳市龍崗區(qū)中心醫(yī)院病理科鼻咽部活檢標(biāo)本86例,其中男64例,女22例。年齡20～85歲,平均43.3歲。均經(jīng)HE切片確診為鼻咽癌。TNM分期：Ⅰ+Ⅱ期38例,Ⅲ+Ⅳ期48例。54例有頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,32例無轉(zhuǎn)移?；颊呋顧z前均未作放化療。所有標(biāo)本均經(jīng)資深病理專家閱片并確診其組織學(xué)類型。
1.2 COX2和p73蛋白檢測
試劑COX2兔抗人單克隆抗體(福州邁新生物技術(shù)有限公司),p73鼠抗人多克隆抗體(美國SANTA CRUZ公司,1∶50)。采用二步法檢測腫瘤組織中COX2和p73蛋白的含量,具體操作步驟按說明書進(jìn)行。常規(guī)切片脫蠟,微波修復(fù)抗原,DAB顯色,蘇木素復(fù)染,中性樹膠封片。顯微鏡下觀察結(jié)果和照相。由試劑公司提供陽性對照片,PBS代替一抗作陰性對照。
1.3 結(jié)果判定
避開腫瘤壞死及邊緣區(qū)域,隨機(jī)計(jì)數(shù)4 個(gè)高倍視野(400倍，不足4個(gè)高倍視野者計(jì)數(shù)組織中的全部細(xì)胞數(shù)),每個(gè)視野下計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞,按著色深淺計(jì)分:弱,1分;中等,2分;強(qiáng),3分。根據(jù)陽性瘤細(xì)胞數(shù)目所占百分比計(jì)分:<10%,0分;10%～25%,1分;26%～50%,2分;>50%,3分。兩項(xiàng)分值相加后計(jì)分:0～1分記為陰性(-),2～4分記為弱陽性(+),5分以上記為陽性(++)。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
計(jì)數(shù)資料采用χ2檢測,等級相關(guān)分析采用Spearman檢驗(yàn),應(yīng)用SPSS 10.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P<0.05為差異有顯著性。
2 結(jié)果
2.1 形態(tài)學(xué)變化
由圖1～2可見，腫瘤組織中COX2蛋白陽性定位于細(xì)胞漿及胞膜,p73蛋白陽性表達(dá)部位位于細(xì)胞核,呈棕黃色或棕褐色。COX2在鼻咽癌組織中的陽性表達(dá)率為80.2%,其中34例(+),35例(++)。p73在鼻咽癌組織中的陽性表達(dá)率為60.5%,其中25例(+),27例(++)。表1 COX2與p73在鼻咽癌組織中表達(dá)的相關(guān)性
2.2 COX2與p73的表達(dá)與鼻咽癌的臨床相關(guān)性
COX2與p73在鼻咽癌組織中的表達(dá)成顯著正相關(guān)(r=0.671,P<0.01),見表1。COX2與p73在鼻咽癌組織中的表達(dá)與臨床特征的相關(guān)性,見表2。表2 COX2、p73的表達(dá)與鼻咽癌的臨床相關(guān)性
3 討論
COX是花生四烯酸合成前列腺素PG的一個(gè)限速酶,可將花生四烯酸轉(zhuǎn)變?yōu)楦鞣NPG產(chǎn)物,維持機(jī)體的各種病理生理過程。COX2基因長約8.3 kb,定位于染色體1q25.2～25.3,由10個(gè)外顯子和9個(gè)內(nèi)含子構(gòu)成,被稱為“快反應(yīng)基因”。其編碼由604個(gè)氨基酸組成的多肽,為誘導(dǎo)性表達(dá),靜息時(shí)并不表達(dá),在大多數(shù)正常組織中難以發(fā)現(xiàn),一般只在受刺激時(shí)迅速合成,這些刺激因子可為細(xì)胞因子、生長因子、促癌劑以及癌基因產(chǎn)物等[1]。
近年研究表明[3]誘導(dǎo)型COX2在多種惡性腫瘤中高表達(dá),可促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制腫瘤細(xì)胞凋亡、促進(jìn)腫瘤新生血管形成、抑制機(jī)體免疫反應(yīng)、增加轉(zhuǎn)移潛能、抑制DNA修復(fù)，也可能是聯(lián)系炎癥與癌變的重要因素之一。鼻咽癌中COX2表達(dá)上調(diào)亦常見。Peng等[4]研究發(fā)現(xiàn)鼻咽癌組織中COX2的陽性表達(dá)率顯著高于正常鼻咽部黏膜組織,其在N1～N3組與N0組差異有顯著性, 且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。蔣代華[5]報(bào)道COX2在正常鼻咽黏膜中不表達(dá),而在鼻咽癌組織中表達(dá)增加,且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、鼻咽部鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展過程密切相關(guān)。本研究結(jié)果中,COX2在鼻咽癌中的陽性表達(dá)率達(dá)80.2%,Ⅰ+Ⅱ期與Ⅲ+Ⅳ期比較有顯著性差異,表明它與腫瘤的進(jìn)展密切相關(guān)，證實(shí)了上述結(jié)論。
P73 基因由于具有與P53基因高度同源的DNA結(jié)合域,因此被歸入p53家族[2]。P73基因所定位的1號染色體短臂(1p36.33)在多種人類腫瘤如神經(jīng)母細(xì)胞瘤、結(jié)腸癌、惡性黑色素瘤等中發(fā)生缺失的頻率非常高，但目前有限的研究表明,p73 基因極少突變,其蛋白產(chǎn)物在正常組織中呈廣泛低水平或陰性表達(dá)。P73基因種植大鼠亦不會(huì)在早期發(fā)生腫瘤,但會(huì)出現(xiàn)明顯的腦和免疫系統(tǒng)發(fā)育缺陷。與此相反，有些癌細(xì)胞中則出現(xiàn)p73蛋白高表達(dá)，故推測在正常生理?xiàng)l件下, P73基因可能發(fā)揮著不同于p53蛋白的作用。p73蛋白功能與p53高度相似,即能以p53蛋白同樣的方式激活P53靶基因p21WAF1等轉(zhuǎn)錄,抑制細(xì)胞生長,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;而且P73基因是單等位基因表達(dá),只有母本等位基因表達(dá),父本等位基因?yàn)槌聊?，故推測P73基因可能通過沉默等位基因而在腫瘤組織中過表達(dá)[6]。
有研究[7]顯示鼻咽癌組織中p73蛋白呈高表達(dá),其Ⅲ、Ⅳ期陽性表達(dá)率與Ⅰ、Ⅱ期比較有顯著性差異。本研究結(jié)果表明,鼻咽癌組織中p73蛋白呈高表達(dá),陽性率為60.5%,Ⅰ～Ⅱ期與Ⅲ、Ⅳ期陽性表達(dá)率亦有顯著性差異,但其表達(dá)與患者性別、年齡、頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無關(guān)，表明鼻咽癌組織中P73基因可能參與調(diào)控鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展。
同時(shí)，COX2與p73在鼻咽癌組織中的表達(dá)成顯著正相關(guān),二者在TNM分期的表達(dá)均有差別，提示COX2與p73共同參與了鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展過程,并可能影響著病情轉(zhuǎn)歸，但其致癌機(jī)制以及COX2和p73的聯(lián)合檢測對于鼻咽癌分期及預(yù)后的判斷價(jià)值尚需研究。
【參考文獻(xiàn)】
[1]Turini ME,DuBois RN.Cyclooxygenase2:a therapeutic target[J].Annu Rev Med,2002,53:35-57.
[2]Kaghad M,Bonnet H,Yang A,et al.Monoallelically expressed gene related to p53 at 1 p36.A region frequently deleted in neuroblastoma and other human cancer[J].Cell,1997,90(4):809-819.
[3]Soo R,Putti T,Tao Q,et al.Overexpression of cyclooxygenase in nasopharyngeal carcinoma and association with epidermal growth factor receptor expression[J].Arch Otolaryngol Head Neck Surg,2005,131(2):147-152.
[4]Peng JP,Chang HC,Hwang CF,et al.Overexpression of cyclooxygenase in nasopharyngeal carcinoma and association with lymphnode metastasis[J].Oral Oncol,2005,41(9):903-908.
[5]蔣代華,郭德玉,劉友生,等.環(huán)氧化酶2在鼻咽癌中的表達(dá)及其臨床意義[J].局解手術(shù)學(xué)雜志,2004,13(3):152-154.
[6]Mai M,Yokomizo A,Qian C,et al.Activation of p73 silent allele in lung cancer[J].Cancer Res,1998,58(11):2 347-2 349.
[7]張?jiān)鲣h，韋敏怡，浣孝強(qiáng)，等.鼻咽癌組織中p73蛋白表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系[J].實(shí)用癌癥雜志，2002，17(4)：380-382
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