作者：王曉暉 作者單位：山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院，山西 太原 030001
【摘要】 目的：研究0.04%倍諾喜(Benoxil)兔前房?jī)?nèi)注射對(duì)角膜內(nèi)皮細(xì)胞的影響。方法：取18只成年健康家兔，隨機(jī)分為2組，0.04%倍諾喜組(實(shí)驗(yàn)組)和平衡鹽溶液組(對(duì)照組)，每組9只(18只眼)，前房?jī)?nèi)注射前及注射后1 d、3 d、14 d，兩組雙眼均行接觸性角膜內(nèi)皮顯微鏡測(cè)量角膜內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)、細(xì)胞密度、細(xì)胞平均面積、面積變異系數(shù)(CV值)、六角形細(xì)胞百分率并取14 d角膜標(biāo)本制作電鏡切片行形態(tài)學(xué)觀察。結(jié)果：0.04%倍諾喜前房注射后3 d，上述5項(xiàng)定量指標(biāo)與對(duì)照組相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，14 d時(shí)與對(duì)照組相比差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，且內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)與正常及對(duì)照組相比變化不明顯。結(jié)論：0.04%倍諾喜兔前房?jī)?nèi)注射后3 d對(duì)角膜內(nèi)皮細(xì)胞造成了損害，至14 d時(shí)，這種影響消失。
【關(guān)鍵詞】 倍諾喜 角膜內(nèi)皮細(xì)胞 研究
Experimental study of Benoxil on the corneal endothelium
WANG Xiaohui，WANG Wanhui，HE Min
(The Second Hospital of Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China)
Abstract Objective：To study the effects of the corneal endothelium of rabbit after being injected 0.04% Benoxil into the anterior chamber.Methods：Eighteen adult rabbits were randomly divided into Benoxil group and control group respectively，nine rabbits(18 eyes)for each group.All rabbits were examined under the contact endothelial specular microscope for endothelial cell number，cell density，average cell area，coefficient of variation of cell area(CV) and ratio of hexagonal cells before being injected and at 1 day，3 days and 14 days after being injected.The corneal endothelium were observed by transmission electron microscopy at 14 days after being injected.Results：There was not almost changes of the ultrastructural for Benoxil after being injected.In 3 days，there was a significant change of the five quantitative indexes between Benoxil and control group(P<0.05).There was no significant difference in 14 days after being injected in the group and control group(P>0.05).Conclusion：0.04% Benoxil can cause damage of corneal endothelial cells in 3 days after being injected.But the changes will almost recover in 14 days after being injected.
Key words Benoxil;corneal endothelium;study
近年來(lái)，隨著眼科手術(shù)技巧及設(shè)備的改進(jìn)，表面麻醉已廣泛應(yīng)用于各種內(nèi)眼手術(shù)并且取得了較好的臨床效果[1]。做為常用的表面麻醉劑，倍諾喜的應(yīng)用與日俱增。但內(nèi)眼手術(shù)存在著由手術(shù)切口滲入前房?jī)?nèi)少量表面麻醉劑的可能，這些麻醉劑的存在是否會(huì)對(duì)角膜內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生不良影響。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)0.04%倍諾喜兔前房?jī)?nèi)注射，探討不同時(shí)間角膜內(nèi)皮細(xì)胞的變化情況，報(bào)告如下：
1 資料與方法
1.1 一般資料
健康成年家兔18只，體重2.0～2.5Kg，雌雄兼用，無(wú)眼疾，由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
1.2 實(shí)驗(yàn)方法
18只家兔分時(shí)間段行雙眼測(cè)量角膜內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)、細(xì)胞平均面積、細(xì)胞密度、面積變異系數(shù)(CV)、六角形細(xì)胞百分率，250 g/L(4 mL/kg)烏拉坦耳緣靜脈麻醉后，4號(hào)半的一次性皮試針頭在顳側(cè)角膜緣內(nèi)穿刺入前房，輕微擺動(dòng)針頭排出0.2 mL房水，然后注入0.2%利多卡因0.2 mL，于注射后1 d、3 d、14 d再次測(cè)量上述指標(biāo)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并于14 d時(shí)取角膜標(biāo)本制作電鏡切片行形態(tài)學(xué)觀察。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
結(jié)果用±s表示，統(tǒng)計(jì)分析采用t檢驗(yàn)，P<0.05作為顯著標(biāo)準(zhǔn)。
2 結(jié) 果
2.1 角膜內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)計(jì)量學(xué)變化(見表1)表1 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組角膜內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)計(jì)量學(xué)變化從表1可看出兔前房?jī)?nèi)注射0.04%倍諾喜后1 d六角形細(xì)胞百分率大于對(duì)照組(P<0.05)，注射后3 d角膜內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)少于對(duì)照組(P<0.01)，平均面積大于對(duì)照組(P<0.05)，細(xì)胞密度小于對(duì)照組(P<0.05)，面積變異系數(shù)大于對(duì)照組(P<0.05)，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，注射后14 d與對(duì)照組比較差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與注射前相比，注射后3 d角膜內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)減少(P<0.05)，平均面積增大(P<0.05)，細(xì)胞密度減小(P<0.05)，面積變異系數(shù)增大(P<0.05)，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，注射后14 d與注射前相比差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
2.2 病理組織學(xué)評(píng)價(jià)
正常角膜內(nèi)皮為單層扁平上皮，細(xì)胞膜完整連續(xù)，相鄰細(xì)胞之間可見緊密連接，胞漿內(nèi)見較發(fā)達(dá)的線粒體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，細(xì)胞核膜完整，切面呈長(zhǎng)橢圓形，長(zhǎng)軸與表面平行。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組前房?jī)?nèi)注射后14 d均見角膜內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)與正常相比無(wú)明顯變化。
3 討 論
角膜內(nèi)皮細(xì)胞是緊貼于角膜后彈力層的單層細(xì)胞，具有特殊的性質(zhì)。正常人角膜由于其膠原纖維黏多糖固有的水化作用而產(chǎn)生一種吸入壓，這種壓力和角膜內(nèi)皮的屏障功能、主動(dòng)液泵功能不停地將角膜基質(zhì)中的水分泵回前房保持動(dòng)態(tài)平衡，以保持角膜恒定的含水量[2]。角膜內(nèi)皮細(xì)胞缺乏分裂增殖的能力，缺失后不能再生，只能由鄰近細(xì)胞通過(guò)擴(kuò)展和移行來(lái)覆蓋局限性缺損。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及離體組織標(biāo)本能夠直接觀察角膜內(nèi)皮細(xì)胞在表面麻醉劑作用下的不同變化，為評(píng)價(jià)其安全性提供了直接依據(jù)。細(xì)胞面積、面積變異系數(shù)、六角形細(xì)胞百分率是反映形態(tài)學(xué)的定量指標(biāo)。這種形態(tài)學(xué)改變比角膜厚度、內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)、細(xì)胞密度等指標(biāo)更加靈敏。
有研究表明表面麻醉劑可以引起角膜內(nèi)皮細(xì)胞Na+K+ATP酶損害[3]，使其活性降低，引發(fā)花生四烯酸內(nèi)源性代謝，并伴有時(shí)間依賴性角膜內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)改變[4]。在這種損傷刺激下，角膜內(nèi)皮細(xì)胞線粒體出現(xiàn)異常，細(xì)胞有氧呼吸和能量代謝障礙，ATP生成減少，引起細(xì)胞水腫，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹引起細(xì)胞蛋白質(zhì)合成障礙，此時(shí)角膜內(nèi)皮細(xì)胞通過(guò)自身改建能力作出反應(yīng)，重建內(nèi)皮泵以維持角膜透明性的功能狀態(tài)，當(dāng)調(diào)節(jié)機(jī)制不能適應(yīng)時(shí)和在內(nèi)皮細(xì)胞移行擴(kuò)大修復(fù)過(guò)程中，就會(huì)出現(xiàn)結(jié)構(gòu)上的改變，直接導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞原有六角形結(jié)構(gòu)破壞。從本實(shí)驗(yàn)可以看出，0.04%倍諾喜經(jīng)兔前房?jī)?nèi)注射后3 d出現(xiàn)角膜內(nèi)皮細(xì)胞各指標(biāo)的改變，至注射后14 d各項(xiàng)指標(biāo)與對(duì)照組相比差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P>0.05)，電鏡所見亦無(wú)顯著變化，正是由于角膜愈合儲(chǔ)備功能被激活，消除了角膜內(nèi)皮細(xì)胞水腫而使其恢復(fù)透明性。但由于人與動(dòng)物之間角膜內(nèi)皮細(xì)胞的再生能力具有極大的種族差異，在用倍諾喜行表面麻醉時(shí)仍應(yīng)避免使其隨手術(shù)切口進(jìn)入前房?jī)?nèi)對(duì)角膜內(nèi)皮細(xì)胞造成損傷。
【參考文獻(xiàn)】
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